无菌医疗器械灭菌验证中生物负载检测的取样方法

生物负载检测是无菌医疗器械灭菌验证的核心环节，其结果直接反映产品生产末端的初始微生物污染水平，是确定灭菌工艺参数（如辐射剂量、湿热灭菌时间）的关键依据。而取样方法作为检测的“第一关”，直接决定了样本的代表性与结果的准确性——不少企业因取样点选择不当、操作不规范，导致检测结果偏离实际，进而引发灭菌工艺参数设定错误，甚至验证失败。本文结合《医疗器械灭菌 生物负载的测定》（GB 18279-2015）、《无菌医疗器械生产管理规范》（YY 0033-2016）等标准要求，系统梳理无菌医疗器械灭菌验证中生物负载检测的科学取样方法，助力企业构建可靠的检测基础。

取样前的准备工作

取样前需确保环境与人员处于受控状态：首先，取样环境应与产品生产末端的环境一致（如万级洁净区生产的产品，取样需在万级或更高级别洁净区进行），避免外部环境微生物的干扰；若需在非洁净区取样（如最终包装后的产品），需对取样台面用75%乙醇擦拭消毒，并避免人员频繁走动带来的扬尘。

人员方面，取样者需经无菌操作培训，穿符合洁净级别的工作服（连体服、手套、口罩缺一不可），且在取样前用消毒湿巾擦拭手套表面——每处理一个样本需更换一次手套，或用新的消毒湿巾重新消毒，避免交叉污染。

工具准备是关键：所有取样工具（无菌棉签、聚酯拭子、采样管、剪刀）需经湿热灭菌（121℃，15min）或环氧乙烷灭菌，使用前需检查包装完整性（如灭菌袋无破损、有效期内）；若产品生产中使用过消毒剂（如乙醇、含氯消毒液），采样管需提前加入中和剂（如硫代硫酸钠），避免消毒剂残留抑制后续微生物培养。

此外，需提前准备样本标签，标注产品名称、批号、生产班次、取样点、时间、取样人，确保每一份样本都能追溯到具体生产环节。

取样点的选择原则

取样点需遵循“代表性、覆盖性、针对性”三大原则：代表性是指优先选择微生物易残留的部位——如一次性输液器的穿刺器斜面、输液管与莫非氏滴管的焊接处，植入式髋关节的螺纹槽、聚乙烯衬垫边缘，这些结构复杂或与人体接触密切的部位，最易积累微生物。

覆盖性要求覆盖生产全流程：从原料（如聚丙烯颗粒、橡胶塞）、半成品（已组装未包装的输液器）到成品（最终灭菌后的包装产品），每个环节都需取样——原料阶段重点取料斗出口的样本（与空气接触最频繁），半成品阶段取组装线末工位的产品（反映生产末端状态），成品阶段取包装完好的产品（验证最终污染水平）。

针对性则结合产品使用场景调整：植入式器械重点取样与人体组织接触的金属柄表面，一次性注射器重点取样针筒内壁与活塞的摩擦面，这些部位的微生物若未被彻底杀灭，直接威胁患者安全。

不同产品类型的取样策略

一次性使用无菌器械（如输液器、注射器）：结构简单、批量大，采用“随机抽样+重点部位擦拭”法。以输液器为例，取穿刺器（斜面+侧孔）、莫非氏滴管内壁、输液管末端接口三个部位，用聚酯拭子蘸0.9%无菌氯化钠溶液，按“Z”字形擦拭每个部位3次（覆盖约5cm²），随后将拭子放入含中和剂的采样管中。

植入式器械（如髋关节、支架）：结构复杂、价值高，采用“全表面覆盖+破坏性取样”法。髋关节需擦拭金属柄外表面（含螺纹槽）、聚乙烯衬垫内表面，再用无菌剪刀剪开连接部位，擦拭内部接触处；支架类产品体积小，可直接放入采样管，加0.1%蛋白胨水振荡10分钟（200次/分钟），提取表面微生物。

无菌敷料（如纱布、绷带）：多孔结构易藏微生物，采用“浸渍法”。取10cm×10cm纱布放入含100ml无菌洗脱液的采样袋，挤压5次使洗脱液渗透，再将洗脱液转移至无菌容器——这种方法能充分提取纤维间隙的微生物，避免擦拭法遗漏。

取样数量的确定依据

取样数量需结合批量与风险等级：根据GB 18279-2015，批量≤1000件取5个样本，1001-10000件取10个，>10000件取20个——确保样本能代表整体批次。

风险等级需额外调整：高风险器械（如心脏起搏器、人工晶状体）取样数量加倍（批量10000件取40个），中风险（输液器、注射器）按标准取，低风险（纱布、绷带）可减至15个；若生产中出现异常（如洁净区温湿度超标），需额外加5-10个样本，重点检测异常时段的产品。

取样工具与操作规范

工具选择需匹配产品特性：光滑表面（如金属器械）用海绵拭子（接触面积大），多孔表面（如敷料）用聚酯拭子（吸附力强）；采样管容量根据样本调整——擦拭输液器用10ml管，浸渍纱布用100ml采样袋。

操作遵循“轻、匀、快”：轻即擦拭力度适中，避免破坏产品涂层或微生物细胞；匀即按同一方向擦拭（如顺时针），避免重复擦拭导致微生物聚集；快即取样后立即密封样本（旋紧采样管、密封采样袋），暴露时间不超过10分钟（防止微生物死亡或繁殖）。

取样后的样本处理

样本保存需控温：取样后立即放入4℃保温箱（冰袋包裹，避免直接接触样本），低温抑制微生物繁殖；运输时用泡沫垫包裹采样管，防止震动破损；液态样本（如洗脱液）需旋紧盖子，避免泄漏。

处理时间需严格：样本需在4小时内送检测室，24小时内完成检测（如平板计数法、膜过滤法）；若无法及时检测，需-20℃冷冻保存，但不超过72小时（过长会降低微生物活性）。

取样过程的记录要求

记录是追溯的关键，需涵盖全流程：产品信息（名称、批号、规格）、环境信息（洁净级别、温湿度、压差）、人员信息（取样人、复核人、培训证号）、取样点（具体部位描述）、工具信息（拭子材质、采样管容量、灭菌批号）、处理信息（保存温度、运输时间、送达时间）。

记录需实时填写，不可事后补填；用签字笔或电子签名（符合《电子签名法》），确保可追溯；若取样中出现异常（如拭子包装破损、样本掉落），需详细记录异常情况、处理措施（如更换拭子、重新取样）及结果。

记录需保存至少3年（或产品有效期后1年），纸质记录防潮防虫，电子记录加密备份——后续若出现验证失败或召回，记录可快速定位问题根源。