转基因成分鉴定中实验室质量体系的内审要点

转基因成分鉴定是保障食品安全与生物安全的核心技术支撑，其结果的准确性直接依赖实验室质量体系的稳健运行。内审作为实验室自我诊断的关键工具，能精准识别质量管控中的漏洞，确保检测过程符合ISO 17025、NY/T 719等标准要求。本文聚焦转基因成分鉴定实验室质量体系的内审要点，从人员、设备、方法、样本等核心环节拆解具体核查内容，为实验室提升质量控制能力提供实操参考。

内审范围与依据的清晰性核查

转基因检测内审需先明确覆盖全流程——从样本接收、核酸提取到结果报告，避免遗漏关键环节（如样本运输温度控制、产物分析后的污染处理）。范围模糊会导致风险盲区，比如若未将“样本前处理的交叉污染防控”纳入审核，可能忽略样本降解或污染对结果的影响。

依据层面需核对是否以ISO 17025为基础，结合GB/T 19495系列转基因检测标准、《转基因生物及其产品检测实验室质量管理规范》（NY/T 719）等文件。例如内审时要检查实验室SOP是否与2021版GB/T 19495.1一致，若仍沿用旧版方法，检测结果可能不符合现行法规要求。

还需确认内审计划的全面性，是否每年度覆盖人员、设备、方法等10大质量要素，避免“重操作、轻管理”的偏向——比如只查PCR操作，不查样本台账的可追溯性。

人员能力的多维度验证

转基因检测对人员专业度要求极高，内审需先查资质：是否具备分子生物学或农学背景，是否有检验检测人员资格证。若某检测员是化学专业出身，需核查是否经过“转基因检测专项培训”及考核，确保其理解PCR原理与结果判读逻辑。

操作技能需看能力验证记录——是否参加过CNAS或农业部组织的转基因检测能力验证，结果是否“满意”。比如某人员连续两次能力验证不合格，需评估其是否适合继续从事检测，或需重新培训。

知识更新要查培训记录：最新GB/T 38570（数字PCR法）发布后，是否组织了针对性培训，培训后有没有考核。若人员不了解数字PCR的“绝对定量”原理，可能误将定量结果当成定性结论。

还要现场观察操作熟练度：比如PCR加样时是否换吸头，荧光曲线判读时是否能区分“假阳性峰”（比如引物二聚体）。若操作不规范，可能导致结果偏差。

设备与试剂的溯源性管理

设备是检测的“工具根基”，内审先查校准：PCR仪的温度准确性直接影响扩增效率，需看是否每12个月校准一次，校准证书是否标注“温度偏差≤0.5℃”。若设备未校准，扩增效率不准会导致结果错误。

设备维护要查记录：荧光定量PCR仪的样本孔是否每周用次氯酸钠清洁，故障停机后有没有“维修记录+性能验证”——比如风扇坏了，维修后要测“温度均一性”，确保孔间温差≤0.3℃。

试剂的溯源性需查供应商评估：引物探针要选有资质的品牌（如Takara），批次有没有“纯度报告”（HPLC≥98%）。保存条件要查冰箱温度记录：-20℃冰箱是否每天记两次温度，波动≤±2℃——若试剂冻融次数多，会失效。

试剂批次要可追溯：某批次引物用于检测MON810玉米，需记录“引物批次、样本编号”，若后续发现该批次引物特异性差，能快速召回受影响样本。

检测方法的有效性核查

方法选择要合规：定性检测优先用GB/T 19495.1（PCR法），定量用GB/T 19495.2（实时荧光PCR）。若用自行开发的方法，需查“方法验证记录”——有没有做“检出限（≤0.1%）、特异性（不交叉反应）、重复性（变异系数≤5%）”。若没验证，方法不可用。

方法执行要一致：实时荧光PCR的循环参数是否严格按标准（95℃预变性10min），若为了省时间改成5min，需查“方法偏离申请”——有没有评估“预变性不足对扩增效率的影响”（若影响≤10%，才允许偏离）。

方法更新要及时：GB/T 38570（数字PCR）发布后，需查实验室有没有引入该方法，有没有做“数字PCR与荧光PCR的结果对比”——比如同一样本，数字PCR测的是0.4%，荧光PCR是0.5%，需确认偏差在可接受范围。

样本全流程的可追溯性审核

样本采集要查记录：有没有“名称、来源、采集人、唯一标识”（如“玉米-20231001-001”），标识不清会导致样本混淆。

运输过程要查温度：冷冻样本用干冰运输，需看“干冰重量、运输时间、温度监控”（≤-18℃）。若干冰耗尽导致样本解冻，需查“降解评估”——若DNA浓度下降50%，要重新采样。

保存要查台账：样本是否按“-20℃保存≤6个月”管理，超期有没有销毁记录。处理要查交叉污染：核酸提取区有没有用“一次性手套+DNA酶清洁台面”，避免样本间污染。

内部质量控制的执行

QC设置要合理：定性PCR需加“阳性+阴性+空白”对照，每批都要查——阳性对照要有扩增，阴性/空白没有。若阴性对照有扩增，需查“污染原因”（比如移液器没换吸头），并重新检测。

定量QC要看校准曲线：实时荧光PCR的R²≥0.99才有效，若R²=0.98，需查“标准品梯度是否准确”（比如10倍稀释时有没有吸错体积）。

异常结果要复核：某样本转基因含量5.2%（超阈值0.5%），需查“双人复核记录”——若复核结果是0.3%，要找原因：是不是第一次试剂加错了，还是设备温度不准。

环境的污染防控

实验室分区要严格：必须分“试剂准备区、样本处理区、扩增区、产物分析区”，物理隔离（比如独立房间+门禁）。若试剂区和扩增区没分开，扩增产物会污染引物，导致假阳性。

环境监控要查压差：试剂区要正压（防止外界污染），扩增区要负压（防止产物扩散），压差计记录是否“试剂区+5Pa，扩增区-5Pa”。若压差不对，要调通风系统。

清洁消毒要查记录：产物分析区的台面每天用次氯酸钠擦，紫外灯每天开30分钟（强度≥70μW/cm²）。人员流动要单向：从试剂区到产物区，不能逆向——若从产物区回试剂区，要换手套+消毒双手。