转基因成分鉴定中样品采集与保存的技术规范

转基因成分鉴定是转基因生物安全监管的核心环节，而样品采集与保存的规范性直接决定后续检测结果的准确性与可靠性。若采样不具代表性、保存条件不当，可能导致假阴性或假阳性结果，影响监管决策。因此，需建立标准化的样品采集与保存技术规范，覆盖“从田间到实验室”的全流程，确保样品的DNA完整性、代表性及无交叉污染。

样品采集的核心原则

样品采集的首要原则是“代表性”——需覆盖待检测批次的所有个体或区域，避免单一来源导致的偏差。例如，批量种子采样需按GB/T 3543.2《农作物种子检验规程 扦样》的分层随机法，从堆垛的上、中、下三层及四角共9个点取种，每点取等量种子混合，确保样品能反映整批种子的转基因成分分布。

“防污染”是第二关键原则。采样工具（如剪刀、镊子、研钵）需提前灭菌：金属工具用75%乙醇擦拭后晾干，一次性工具选择无DNA酶的材质。采样过程中，避免接触外源DNA——如戴无粉手套操作，不直接用手触摸样品，工具不接触其他转基因材料。

“及时性”不可忽视。新鲜植物组织采集后，应在2小时内放入冰盒（4℃），避免细胞破裂释放的核酸酶降解DNA。若无法及时处理，需立即用硅胶干燥或冻存，防止DNA质量下降。

不同类型样品的采集方法

植物组织样品：种子类样品需按批次规模调整采样量——500kg以下取1kg混合样，500kg以上每增500kg加取0.5kg，用四分法缩分至500g备用；叶片类需选健康成熟的功能叶（如玉米顶部向下第3-5片叶），每株取2-3片，避免幼叶（DNA含量低）或病叶（含降解DNA）。

加工食品样品：液体类（如大豆油）需摇匀后从容器中部取50ml，装无菌离心管；固体类（如大豆粉）用无菌粉碎机粉碎至粒径<1mm，取200g装密封袋；半固体类（如豆瓣酱）搅拌均匀后取100g，装无菌罐。加工品因DNA片段较短，需增加采样量（如固体样取500g以上）保证检测模板充足。

动物源性样品（如转基因饲料）：取不同包装批次的样品各1kg，用无菌搅拌机混匀，分样后保存，避免饲料中的骨粉、蛋白质干扰DNA提取。

样品采集的数量与部位要求

农作物群体样品：小面积（≤1亩）取10-15株，大面积每增1亩加取5株，每株取完整地上部分（如玉米取果穗、茎秆、叶片），确保覆盖不同器官；加工品需保证“均一性”——面粉从包装袋上、中、下三层各取100g，混合后缩分至200g。

特殊样品：转基因疫苗、微生物制剂需在无菌环境下采样，用无DNA酶管，避免杂菌污染导致转基因成分被掩盖。

样品保存的基本原则

样品保存的核心是“防止DNA降解”。DNA降解的主因是核酸酶酶解、氧气氧化及高温断裂，因此需围绕“抑制酶活性、隔绝氧气、降低温度”设计条件：短期（≤7天）用4℃冷藏，长期（>7天）用-20℃或-80℃冷冻；干燥样品需密封防吸潮，避免微生物繁殖；避光保存（紫外线破坏碱基结构），用棕色瓶或铝箔纸包裹。

不同类型样品的具体保存条件

新鲜植物组织：叶片采集后用滤纸吸干水分，装自封袋放冰盒（4℃），24小时内处理；长期保存需-80℃冻存，或用硅胶干燥（硅胶:样品=5:1，密封2-3天至干燥，室温保存）。

加工食品：干燥类（面粉、大豆粉）密封于铝箔袋，存25℃以下、湿度≤60%环境；油脂类（大豆油）装棕色瓶，避光照室温保存；发酵类（豆瓣酱）4℃冷藏，防止微生物过度繁殖。

DNA提取物：溶解于TE缓冲液（pH8.0），-20℃保存，避免反复冻融（会导致DNA断裂）；长期保存可沉淀于无水乙醇中，-20℃存放。

样品的标识与记录规范

样品需“双标识”：容器外贴纸质标签（含名称、来源、采集时间、人、批次号、保存条件），容器内放防水标签（聚酯材质）防受潮模糊。记录需“全程可追溯”——采集时记环境温度、样品状态（新鲜/干燥）、处理时间；保存时记温度、时间；运输时记方式、温度。

避免交叉污染的技术措施

工具专用：不同样品用不同剪刀、研钵，重复使用前用75%乙醇清洗晾干；粉碎机用无水乙醇洗内壁，晾干后再用。区域分区：设独立采集区、粉碎区、保存区，处理前用0.5%次氯酸钠擦工作台，紫外线照30分钟。人员操作：戴无DNA酶手套，破损即换；避免手触样品，处理前消毒；操作时不说话、不打喷嚏，防止飞沫污染。

样品运输的技术要求

短途（≤2小时）：用冰盒（冰袋保持4℃以下），样品用泡沫垫固定防碰撞；冰袋密封防冷凝水浸湿。长途（>2小时）：用干冰运输（每kg样品用500g干冰，维持-20℃约24小时），样品装保温箱，外用胶带密封；运输中放温度记录仪，监测温度是否符合要求。DNA提取物需用泡沫箱装气泡膜，防震荡断裂；微生物样品用无菌容器，干冰运输防杂菌污染。