欧盟化妆品法规对化妆品毒理测试的眼刺激性测试项目规定

欧盟作为全球化妆品监管最严格的地区之一，其化妆品法规（EC 1223/2009）将“眼刺激性”列为化妆品安全评估的核心指标之一。眼黏膜是人体敏感组织，化妆品（尤其是护肤品、彩妆、清洁产品）接触眼部可能引发红肿、疼痛甚至不可逆损伤，因此法规对眼刺激性测试的项目、方法及数据要求作出了明确规定，旨在从源头规避产品对消费者眼部的潜在风险。

欧盟化妆品法规的眼刺激测试法律依据

欧盟化妆品法规（EC 1223/2009）是欧盟化妆品监管的“母法”，其第3条明确要求“化妆品在正常或合理可预见的使用条件下，不得对人体健康造成损害”，而眼刺激性作为“损害人体健康”的典型情形，被纳入必须评估的风险类别。

法规第10条进一步规定，化妆品上市前必须由合格安全评估员（QSA）完成安全评估，其中眼刺激性评估是“皮肤及黏膜接触风险评估”的重要组成部分。安全评估员需依据法规附录Ⅰ（《安全评估指南》）的要求，收集并分析眼刺激性测试数据，确保数据的科学性与可靠性。

此外，法规附录Ⅴ（《化妆品测试方法》）对眼刺激性测试的具体方法作出了规定，包括体内测试（如兔眼刺激性测试）与体外替代测试（如EpiOcular™、CORNEATP-模型），明确了不同测试方法的适用场景及结果判定标准。

值得注意的是，法规第18条禁止在欧盟境内对化妆品成品或原料进行动物测试（“动物测试禁令”），但针对眼刺激性测试，法规允许在特定情况下使用经过验证的体外替代方法，或引用非欧盟地区的历史动物测试数据（需符合欧盟的“数据可接受性”要求）。

眼刺激测试的核心测试项目：组织学与功能性评估

欧盟法规要求眼刺激性测试需覆盖“组织学损伤”与“功能性影响”两大维度。组织学评估主要针对眼黏膜的结构完整性，例如角膜上皮细胞的脱落或坏死、结膜上皮的水肿或增生、虹膜的炎症细胞浸润等，这些指标能直接反映产品对眼部组织的物理或化学损伤程度。

功能性评估则聚焦于眼部的生理功能是否受影响，比如泪液分泌量的变化（使用Schirmer试验测量）、泪膜破裂时间（评估泪膜稳定性，反映眼部干燥程度）、瞳孔对光反射（判断虹膜或视神经是否受损）等。例如，某些含酒精或表面活性剂的化妆品可能破坏泪膜的脂质层，导致泪膜破裂时间缩短，引发眼部干涩或刺痛，这类功能性变化必须纳入测试范围。

此外，测试还需评估“可逆性”——即损伤是否能在一定时间内（通常为24-72小时）自行恢复。法规要求，若测试结果显示损伤在72小时内未恢复，需进一步开展长期追踪测试，以确定是否存在不可逆损伤风险。

对于彩妆产品（如睫毛膏、眼线笔），法规特别要求增加“机械性刺激”测试，评估产品颗粒（如滑石粉、颜料）对眼结膜的摩擦损伤，或产品在眼部停留时对睑板腺分泌的影响（睑板腺功能障碍可能引发干眼症）。

体外替代测试的具体方法与数据要求

由于欧盟的“动物测试禁令”，体外替代测试成为眼刺激性评估的主要手段。法规认可的体外方法需通过ECVAM（欧盟替代方法验证中心）的验证，确保其结果与体内测试（如兔眼测试）具有相关性。目前常用的方法包括：

EpiOcular™模型：由人角膜上皮细胞培养而成的三维模型，模拟角膜的多层结构，通过测量细胞存活率（MTT法）、乳酸脱氢酶（LDH）释放量（反映细胞膜损伤）评估刺激性。法规要求，若细胞存活率低于70%，需判定为“潜在刺激性”，需进一步开展补充测试。

CORNEATP-模型：基于人源角膜基质细胞的三维模型，可评估产品对角膜基质的穿透性及长期损伤。测试中需测量模型的透明度（反映角膜浑浊度）与屏障功能（通过荧光素钠渗透率测量），若透明度下降超过30%或渗透率增加超过2倍，需标记为“高刺激性”。

BCOP试验（牛角膜浑浊度与通透性试验）：使用牛角膜作为替代组织，通过测量浑浊度（使用浊度计）与荧光素钠渗透率（评估角膜屏障功能）判断刺激性。法规要求，BCOP试验的结果需与体外细胞模型的结果相互印证，避免单一方法的局限性。

此外，法规要求体外测试需提供“剂量-反应关系”数据——即不同浓度的测试物质（如化妆品原料的1%、5%、10%溶液）对模型的影响，以确定“无刺激性剂量”（NOEL），为化妆品配方中的原料浓度限制提供依据。

原料与成品的眼刺激测试差异要求

欧盟法规对化妆品原料与成品的眼刺激测试作出了差异化规定。对于原料（尤其是新原料，即未被欧盟化妆品原料数据库（CosIng）收录的成分），法规要求提供“全面的眼刺激性数据”，包括体外替代测试、毒代动力学数据（如原料在眼黏膜的吸收速率）及结构-活性关系（SAR）分析（通过化学结构预测刺激性）。

例如，若原料为阳离子表面活性剂（如鲸蜡基三甲基氯化铵），由于其易与眼黏膜的阴离子蛋白结合，导致细胞膜损伤，法规要求必须开展EpiOcular™模型测试与BCOP试验，且需提供“最低刺激性浓度”（MSC）——即原料在配方中使用时，不会引发眼刺激的最高浓度。

对于成品，法规允许采用“证据权重”（weight-of-evidence）方法，即结合原料的测试数据、配方的pH值（眼黏膜适宜pH为7.0-7.4，若成品pH低于5.5或高于8.5，需额外测试）、表面张力（过高或过低的表面张力可能破坏泪膜）及使用场景（如喷雾类产品可能直接接触眼部，需更严格测试）等因素，综合评估成品的眼刺激性。

例如，一款pH为9.0的洁面乳，即使原料的眼刺激测试结果为“无刺激性”，法规仍要求对成品开展BCOP试验，因为高pH值本身可能对眼黏膜造成化学灼伤；而一款pH为7.2的面霜，若其原料均为“无刺激性”且表面张力在30-40 mN/m（接近泪液表面张力），则可豁免部分成品测试。

眼刺激测试的结果判定与分类标准

欧盟法规依据测试数据将化妆品的眼刺激性分为四个等级：无刺激性、轻度刺激性、中度刺激性、重度刺激性。判定标准主要基于以下指标：

无刺激性：体外测试中细胞存活率≥90%，角膜透明度下降≤10%，荧光素钠渗透率≤1.5倍；体内测试（若允许）中结膜无充血、角膜无浑浊，72小时内完全恢复。

轻度刺激性：细胞存活率70%-90%，角膜透明度下降10%-30%，荧光素钠渗透率1.5-2倍；体内测试中结膜轻度充血，角膜轻度浑浊，48小时内恢复。

中度刺激性：细胞存活率50%-70%，角膜透明度下降30%-50%，荧光素钠渗透率2-3倍；体内测试中结膜中度水肿，角膜中度浑浊，72小时内未完全恢复。

重度刺激性：细胞存活率<50%，角膜透明度下降>50%，荧光素钠渗透率>3倍；体内测试中出现角膜溃疡、虹膜炎症或视力下降，需立即判定为“不合格”。

法规要求，若产品被判定为“中度或重度刺激性”，必须在包装上标注“避免接触眼部”或“若接触眼部，立即用清水冲洗”等警示语；若为“重度刺激性”，则直接禁止上市销售。

特殊人群的眼刺激测试考量：儿童与敏感肌

欧盟法规对“特殊人群用化妆品”的眼刺激测试作出了额外要求。儿童化妆品（如儿童沐浴露、儿童防晒霜）由于使用人群的眼部黏膜更薄、修复能力更弱，且可能因儿童误触导致产品进入眼部，法规要求测试时需采用“低剂量重复接触”模式——即模拟儿童可能的使用场景（如每天接触1次，连续7天），评估产品的累积刺激性。

例如，一款儿童洗发水，即使单次接触的眼刺激测试结果为“无刺激性”，法规仍要求开展“7天重复接触测试”，使用EpiOcular™模型每天暴露1次（每次15分钟），若第7天的细胞存活率低于80%，需判定为“不适合儿童使用”。

对于敏感肌人群用化妆品（如“敏感肌专用”爽肤水），法规要求测试时需增加“炎症介质释放”评估，即测量体外模型中白细胞介素-1β（IL-1β）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）等炎症因子的分泌量。若炎症因子分泌量较空白对照组增加超过2倍，需标注“可能引发敏感肌眼部不适”。

此外，针对隐形眼镜佩戴者（约占欧盟人口的15%），法规要求对接触类化妆品（如眼影、睫毛膏）开展“隐形眼镜相容性测试”，即评估产品成分是否会沉积在隐形眼镜表面（影响镜片透氧性），或与镜片材料发生反应（导致镜片变形），进而引发眼部炎症。

眼刺激测试的数据保存与追溯要求

欧盟法规要求化妆品企业需保存眼刺激测试的所有原始数据（包括测试方法、试剂批次、仪器校准记录、模型供应商信息等）至少10年，以便欧盟药品管理局（EMA）或各成员国的监管机构（如德国的BfArM）进行核查。

数据保存的内容需包括：

（1）测试物质的信息（如原料名称、CAS号、纯度）。

（2）测试方法的详细描述（如体外模型的来源、培养条件、测试步骤）。

（3）原始测试数据（如细胞存活率的吸光度值、角膜透明度的浊度计读数）。

（4）结果判定的依据（如与ECVAM验证标准的对比）。

（5）安全评估员的签名与日期。

若企业引用非欧盟地区的测试数据（如美国FDA的测试报告），需提交“数据桥梁”文件，说明该数据与欧盟法规要求的一致性——例如，美国的兔眼测试数据需符合欧盟的“3R原则”（替代、减少、优化），且测试方法需与欧盟附录Ⅴ的要求一致。

此外，法规要求企业建立“产品追溯系统”，即一旦某款产品被投诉引发眼部不适，企业需在48小时内提供该产品的眼刺激测试数据、原料供应商信息及生产批次记录，以便监管机构快速定位问题根源。