稳定性试验中纳米制剂的稳定性评价方法

纳米制剂因能改善药物溶解性、提高靶向性及降低毒性，已成为药剂学研究的热点。然而，纳米尺度下的粒子易受环境因素（如温度、pH、离子强度）影响，发生聚集、沉降、药物泄漏或降解等问题，直接影响制剂的安全性与有效性。因此，稳定性试验中建立科学的评价方法，全面表征纳米制剂的稳定性，是其产业化与临床应用的关键环节。本文将系统梳理稳定性试验中纳米制剂的主要评价方法，为相关研究提供实践参考。

物理稳定性评价：外观与分散性监测

物理稳定性是纳米制剂最直观的评价指标，主要关注粒子的分散状态与外观变化。试验中，研究人员通常将纳米制剂置于加速（如40℃/75%RH）或长期（如25℃/60%RH）稳定性条件下，定期取样进行肉眼观察：若出现明显沉淀、分层、漂浮物或颜色改变（如脂质体由澄清变浑浊），则提示物理稳定性下降。

除肉眼观察外，浊度法是量化分散性的常用手段。通过浊度计测定600nm波长下的吸光度（A值），A值越小说明体系越澄清，分散性越好。例如，某聚合物纳米粒制剂在4℃储存28天后，A值从0.12升至0.35，表明粒子发生聚集，分散性降低。

此外，静态光散射（SLS）可通过测定散射光强度的变化，反映粒子的聚集程度。当散射光强度随时间增加时，说明纳米粒相互聚集，形成更大的聚集体，这也是判断分散性的重要依据。

粒径与Zeta电位：胶体稳定性的核心指标

粒径及分布是纳米制剂的核心质量属性，直接影响体内分布与疗效。动态光散射（DLS）是测定粒径的金标准，可快速得到平均粒径、粒径分布指数（PDI）及多分散性。试验中，需在不同时间点取样，若平均粒径增大超过20%，或PDI从0.15升至0.3以上（提示粒径分布变宽），则说明粒子聚集，稳定性下降。例如，脂质体制剂在25℃储存1个月后，粒径从100nm增至180nm，PDI从0.12升至0.28，提示发生明显聚集。

Zeta电位反映纳米粒表面的电荷密度，是判断胶体稳定性的关键参数。通常，Zeta电位绝对值大于30mV时，粒子间静电排斥力强，不易聚集；若绝对值降至20mV以下，静电稳定作用减弱，易发生沉降。例如，某阳离子纳米粒的Zeta电位从+35mV降至+18mV后，体系出现明显沉淀，证实稳定性丧失。

需注意的是，DLS测定需避免粒子浓度过高（通常稀释至0.1-1mg/mL），否则会因多重散射影响结果准确性；同时，应选择与制剂介质一致的分散液（如PBS），模拟实际储存条件。

化学稳定性：药物与载体的降解评估

化学稳定性关注药物活性成分（API）及纳米载体的降解情况。对于API，高效液相色谱（HPLC）是常用方法，通过测定主峰面积变化计算药物残留量，同时检测有关物质（如降解产物）的含量。例如，某紫杉醇纳米粒制剂在40℃储存3个月后，紫杉醇含量从98%降至85%，有关物质从0.5%升至3.2%，提示药物发生降解。

纳米载体的降解需针对其材质选择相应方法。例如，脂质体的磷脂易发生氧化，可通过硫代巴比妥酸（TBA）法测定丙二醛（MDA）含量——MDA是磷脂氧化的终产物，含量越高说明氧化程度越严重。若某脂质体的MDA含量从0.2μmol/L升至1.5μmol/L，提示磷脂氧化显著，载体稳定性下降。

对于聚合物载体（如PLGA），可通过凝胶渗透色谱（GPC）测定分子量变化：若分子量下降超过10%，说明聚合物发生降解，载体结构破坏，可能导致药物泄漏。

包封率与载药量：药物泄漏的直接指标

包封率（EE）是指被纳米载体包裹的药物占总药物的比例，载药量（DL）是指药物占纳米制剂总质量的比例，两者直接反映药物的保留能力。稳定性试验中，需定期测定EE与DL，若EE下降超过10%，则提示药物泄漏，制剂失效。

分离游离药物是测定EE的关键步骤，常用方法包括：

（1）透析法：用截留分子量小于纳米粒的透析袋（如3.5kDa）分离游离药物，透析后测定袋内药物含量。

（2）超速离心法：通过100000×g离心30分钟，使纳米粒沉淀，上清液为游离药物。

（3）微滤法：用0.22μm滤膜过滤，游离药物通过滤膜，纳米粒被截留。例如，某阿霉素脂质体的EE在4℃储存2个月后从92%降至78%，说明药物发生明显泄漏。

需注意的是，分离方法需验证回收率：若游离药物回收率低于90%，则方法不可靠。例如，超速离心法处理聚合物纳米粒时，若纳米粒沉淀不完全，会导致游离药物测定值偏高，EE计算值偏低。

药物释放行为：体内有效性的体外预测

药物释放行为是纳米制剂稳定性的重要体现，直接影响体内药物浓度与疗效。体外释放试验通常采用透析袋法：将纳米制剂装入透析袋（截留分子量匹配载体大小），置于释放介质（如pH7.4的PBS，含0.1%Tween-80模拟体液）中，37℃恒温振荡，定期取样测定释放介质中的药物浓度，绘制释放曲线。

稳定性试验中，需比较初始与加速/长期储存后的释放曲线：若释放速率明显加快（如24小时释放率从50%升至75%），或释放曲线形态改变（如从缓释变为突释），则提示制剂稳定性下降。例如，某PLGA纳米粒在40℃储存1个月后，12小时释放率从30%升至55%，说明载体降解导致药物突释。

释放介质的选择需模拟体内环境：如口服制剂需考察pH1.2（胃液）、pH6.8（肠液）的释放行为；注射制剂需考察pH7.4的PBS。此外，释放曲线的拟合（如Higuchi模型、Ritger-Peppas模型）可进一步分析释放机制，若拟合参数（如扩散指数n）发生变化，说明释放机制改变，稳定性受影响。

体外生理环境稳定性：模拟体内行为的关键

纳米制剂进入体内后会面临复杂的生理环境（如血清蛋白、酸性溶酶体、剪切力），因此需评估其在模拟生理环境中的稳定性。血清稳定性试验是常用方法：将纳米制剂与10%胎牛血清（FBS）混合，37℃孵育，定期用DLS测粒径变化。若粒径增大超过30%，说明纳米粒吸附血清蛋白形成“蛋白冠”，导致聚集。例如，某金纳米粒与FBS孵育2小时后，粒径从50nm增至120nm，提示血清稳定性差。

溶酶体稳定性试验需模拟细胞内酸性环境（pH5.0-5.5）：将纳米制剂置于pH5.0的醋酸缓冲液中，37℃孵育，测定药物释放率与载体形态。若药物释放率在2小时内从10%升至40%，说明载体在酸性条件下降解，药物快速泄漏。

剪切力稳定性试验模拟血液流动的剪切力（如动脉血流剪切速率约1000-10000s⁻¹）：用流变仪或微流控装置施加剪切力，观察纳米粒是否破碎。若剪切后粒径分布变宽或出现大量小颗粒，说明载体结构破坏，稳定性下降。

微观形态分析：直观反映载体结构完整性

微观形态是纳米制剂稳定性的直观证据，透射电子显微镜（TEM）与扫描电子显微镜（SEM）是常用技术。TEM可观察纳米粒的内部结构（如脂质体的双层膜、纳米球的核壳结构），SEM可观察表面形态（如是否光滑、有无裂缝）。例如，某脂质体在储存后，TEM显示双层膜破裂，形成不规则碎片，证实载体结构破坏。

冷冻透射电镜（cryo-TEM）是更先进的技术，可在水化状态下观察纳米粒形态，避免干燥过程导致的形态改变。例如，cryo-TEM观察某聚合物纳米粒，储存前为球形，储存后变为椭圆形并出现凹陷，说明形态发生不可逆变化。

需注意的是，电镜样品制备需避免聚集：TEM样品需稀释至合适浓度（如0.01-0.1mg/mL），并使用支持膜（如碳膜）；SEM样品需喷金处理，增强导电性，但可能影响形态观察。