日化产品检测中丙烯酰胺的样品前处理（固相萃取）步骤

丙烯酰胺是一种具有神经毒性与潜在致癌性的极性小分子，常源于日化产品中聚丙烯酰胺类增稠剂的降解（如洗发水、面霜中的增稠成分）。准确检测其含量是保障消费者安全的关键，而固相萃取作为前处理核心步骤，直接影响目标物富集效率与杂质去除效果，决定后续色谱/质谱检测的准确性。本文聚焦日化产品中丙烯酰胺的固相萃取前处理，拆解从取样到定容的全流程操作，涵盖不同产品类型的处理差异、柱选择、活化、上样等关键细节，为实验室规范操作提供参考。

样品前期处理：适配日化产品形态的提取

不同形态日化产品的前期处理需针对性调整。膏霜类（如面霜、身体乳）：取1g（精确至0.001g）样品于50mL离心管，加10mL乙腈（乙腈能沉淀蛋白质与油脂，减少干扰），用10000rpm高速均质机均质2分钟，确保样品完全分散；再超声30分钟（200W）促溶，4000rpm离心10分钟取上清液。

液体类（如洗发水、沐浴露）：取2mL样品加8mL乙腈，vortex混合1分钟替代均质，超声15分钟后离心。粉状类（如洗衣粉、洁面粉）：取1g样品加10mL水溶解，再加10mL乙腈，混合后超声20分钟离心。提取时需保持溶剂比例稳定（如膏霜1:10、液体1:5），避免因溶剂不足导致提取不完全；上清液需用0.45μm有机滤膜过滤，防止堵塞固相萃取柱。

固相萃取柱选择：匹配丙烯酰胺的极性特征

丙烯酰胺（LogP=-0.67）为强极性小分子，需选亲水亲脂平衡（HLB）柱——其固定相是N-乙烯基吡咯烷酮与二乙烯苯共聚物，兼具亲水与亲脂基团，能有效保留极性化合物。相比之下，C18柱（非极性）对极性化合物保留弱，易导致丙烯酰胺流失；MCX柱（阳离子交换）需调pH至酸性，增加操作复杂度。因此HLB柱（如60mg/3mL）是日化产品丙烯酰胺前处理的首选。

柱活化：湿润固定相的关键步骤

活化目的是去除柱内杂质、湿润固定相并使其溶胀。操作：将HLB柱装在固相萃取装置上，先加5mL甲醇，以1-2mL/min流速流过——甲醇能完全湿润固定相；再加5mL超纯水，置换柱内甲醇（避免后续水相样品与甲醇不兼容导致固定相收缩）。活化时需避免柱床干涸（即前一种溶剂流完立即加下一种），否则固定相收缩形成空隙，影响保留效果。活化后保持柱床湿润（液面高于固定相1-2mm），准备上样。

上样操作：控制流速与避免干柱

将提取的上清液倒入活化后的HLB柱，以1-2mL/min流速流过。流速过快会缩短样品与固定相接触时间，导致丙烯酰胺保留不完全；过慢则降低效率。上样时样品浓度需控制在0.1-1mg/mL（避免超过柱保留容量，HLB柱每100mg固定相约保留10mg极性化合物）；若样品体积过大（如超过10mL），可先浓缩至5mL再上样。全程需观察液面，确保不低于固定相表面（避免干柱失效）。

淋洗：去除弱保留杂质的核心环节

上样后用5-10mL超纯水或5%甲醇水（甲醇体积分数）淋洗，流速1-2mL/min。水能洗脱无机盐、糖类等弱极性杂质；5%甲醇水可增强对弱极性油脂的洗脱能力，同时不影响丙烯酰胺保留（其与HLB的相互作用强于杂质）。淋洗完成后需排干柱内液体（液面降至固定相表面），避免后续洗脱液被稀释。

洗脱：完全回收目标物的关键

用5-10mL甲醇或乙腈洗脱，流速1-2mL/min。甲醇/乙腈能破坏丙烯酰胺与HLB的氢键作用，将其完全洗脱。需确保洗脱液完全流过柱床（可轻敲柱管让残留液流出）；若洗脱体积不足（如<5mL），需补加至10mL，避免目标物残留。收集洗脱液于干净离心管中，准备浓缩。

浓缩定容：匹配后续检测的最后一步

将洗脱液置于氮吹仪，40℃以下（丙烯酰胺沸点125℃，高温易挥发损失）吹至近干（剩余约0.1mL）——若吹至完全干燥，丙烯酰胺会吸附在管壁难以溶解；若剩余过多（>0.5mL），定容后浓度低影响检测灵敏度。近干后加1mL流动相（如0.1%甲酸水-乙腈，90:10），涡旋1分钟促溶。流动相需与后续检测匹配：0.1%甲酸水能增强LC-MS/MS的离子化效率，乙腈改善色谱峰形。定容后用0.22μm有机滤膜过滤，去除微小颗粒。

质控要点：确保前处理的准确性

加标回收实验是验证关键：取样后加10μg/kg丙烯酰胺标准品，按步骤处理后计算回收率（80%-120%为可接受）——回收率低可能是洗脱不完全或氮吹温度高；回收率高则可能试剂污染（如甲醇含丙烯酰胺）。同时需做空白实验：用不含丙烯酰胺的日化产品按相同步骤处理，检测空白样品中的丙烯酰胺含量，排查污染来源（试剂、柱、器具需用超纯水冲洗3次以上）。