药品微生物检测中防止污染的操作规范有哪些

药品微生物检测是保障药品安全的核心环节，其结果直接影响对药品微生物限度、无菌性的判断。若检测过程中发生污染，不仅会导致结果偏差，还可能误导药品质量评估，威胁患者用药安全。因此，建立覆盖环境、人员、试剂、设备、样本及操作全流程的防污染规范，是微生物检测的基础要求。本文将从关键环节出发，详细阐述药品微生物检测中防止污染的具体操作规范。

实验室环境的分级管控与动态监测

药品微生物检测需依据ISO 14644-1标准划分洁净区域：无菌检测、植入性药品检测需在A级（局部百级，悬浮菌≤10CFU/m³、沉降菌≤1CFU/4小时）或B级（背景万级）洁净区进行；普通微生物限度检测可在C级（十万级）或D级（三十万级）区开展。各区域需维持稳定压差——A级区相对于B级区压差≥10Pa，B级区相对于相邻低级别区压差≥10Pa，防止外界未净化空气渗入。

环境监测需常态化：每日实验前检测沉降菌（用90mm培养皿暴露30分钟）、浮游菌（用采样器采集100L空气）；每周检测表面微生物（用无菌棉签擦拭设备表面或人员手套，接种培养）。若监测结果超标，需立即停止实验，排查送风系统、过滤器完整性等问题，直至恢复合格。

洁净区清洁需遵循“从内到外、从上到下”顺序：先用无尘布蘸75%乙醇擦拭墙面、设备表面，再用拖把拖地面；禁止存放无关物品，避免积尘成为微生物滋生源。

人员操作的全流程合规要求

人员是最易引入污染的因素，需严格执行“二次更衣”：一更时更换洁净鞋，脱个人衣物放入专用柜，穿洁净内衣；二更时用抗菌洗手液按“七步洗手法”洗手1分钟，再用75%乙醇喷洒双手至湿润（作用30秒），随后戴无菌口罩（覆盖口鼻至下颌）、帽子（包裹全部头发），最后穿连体洁净服（拉链拉至领口，袖口、裤脚塞入手套、鞋内）。

操作时需保持“静态”：避免大幅度动作、交谈或咳嗽，手不得接触面部、头发或洁净服外表面；手套每2小时更换一次，破损或污染需立即更换——更换前需再次消毒双手。

人员需定期培训：每季度开展微生物基础知识（常见污染菌种类、传播途径）、操作规范（无菌接种、样本处理）考核；健康监测不可少——感冒、发烧或皮肤破损者禁止进入洁净区，防止自身微生物扩散。

试剂与耗材的无菌处理及储存

试剂与耗材的无菌性是结果可靠的前提。培养基、0.9%无菌氯化钠溶液等耐高温试剂，采用高压蒸汽灭菌（121℃、15psi、20分钟）；热敏性试剂（酶类、维生素溶液）用0.22μm聚醚砜（PES）滤膜过滤除菌——过滤前需用75%乙醇消毒滤器外壳，过滤后立即密封。

培养皿、吸管、镊子需选“辐照灭菌”的无菌包装产品，打开前用75%乙醇喷洒包装表面；取用时常需避免手接触无菌部分（如培养皿内壁、吸管尖端）。

灭菌后的试剂需标注“灭菌日期、有效期”，储存在4℃~8℃冷藏柜中；未用完的试剂24小时内使用，剩余部分丢弃——禁止反复加热或冷藏，防止二次污染。

设备的清洁、验证与维护

生物安全柜使用前需开风机30分钟，用75%乙醇擦拭工作台面、侧壁及后壁；操作时物品放在前1/3区域，不得超过台面高度1/2。使用后关闭前窗至“安全位置”，继续运行风机30分钟，再消毒内部。

灭菌锅需每月用嗜热脂肪芽孢杆菌生物指示剂（ATCC 7953）验证：将指示剂放入灭菌锅中心，灭菌后培养48小时，若指示剂不变色（芽孢被杀死）则合格。

培养箱每周清洁一次：用含氯消毒液（有效氯500mg/L）擦拭内壁及托盘，再用75%乙醇去除残留；温度需每日记录，偏差超过±1℃时用标准温度探头校准。

样本的采集、传递与接收规范

样本采集需避免外源性污染：固体药品（片剂、胶囊）用无菌镊子取深层部分，液体药品（注射液、口服液）摇匀后用无菌吸管吸取中部液体；取样工具一次性使用，重复使用需高压灭菌。

样本传递通过“双门传递窗”：放入样本后关闭外侧门，开启紫外线消毒30分钟（强度≥70μW/cm²），再打开内侧门取出——不得同时打开两侧门，防止空气对流。

样本接收需检查“三要素”：容器是否密封（无破损、泄漏）、标签是否清晰（名称、批号、采集时间）、状态是否正常（无变色、浑浊）。异常样本需拒收并记录。

实验操作的细节控制要点

接种时用“火焰灭菌法”：接种环（针）在酒精灯火焰上烧至红热（约5秒），随后在火焰旁冷却10秒（避免烧死待检微生物）；培养皿倾斜45°，开口朝向火焰，接种环不得接触培养皿边缘。

稀释操作需注意：用无菌吸管吸取样本时，尖端距容器口1cm~2cm，释放液体沿管壁缓缓注入（防止气泡携带微生物）；每稀释一次更换一支吸管。

培养时需“倒置”：接种后的培养皿倒置放入培养箱，避免冷凝水滴落污染菌落；培养温度严格遵循标准（细菌36℃±1℃、真菌25℃±1℃），期间不得随意开门，查看需快速操作（≤10秒）。

清洁与消毒的标准化流程

实验前用75%乙醇擦拭台面、生物安全柜内壁及设备表面；实验后先收集废弃物（用过的吸管、接种环）放入黄色医疗废物袋，再用含氯消毒液（有效氯1000mg/L）擦拭台面、地面——作用30分钟后用清水去除残留。

消毒试剂需“现配现用”：含氯消毒液24小时内使用（避免有效氯挥发），75%乙醇用无水乙醇与无菌水按3:1配制（不得用自来水）。

每周全面消毒：用紫外线灯照射洁净区30分钟（关闭门窗），更换生物安全柜高效过滤器（若阻力超额定值）；每月用“环境表面采样”验证消毒效果——表面微生物≥10CFU/25cm²需重新消毒。

污染事件的应急处理流程

若发现污染（培养皿出现杂菌、样本泄漏），立即停止实验：第一步隔离污染区（红色胶带围起，禁止进入）；第二步清除污染物（用无菌棉签蘸含氯消毒液（有效氯2000mg/L）擦拭泄漏物，再用75%乙醇擦拭）；第三步调查原因（用鱼骨图分析人员、设备、试剂、环境）——操作失误需重新培训，设备故障需维修后验证。

污染事件需详细记录：时间、地点、样本名称、污染程度、处理方法及责任人，存档3年——便于追溯与预防。