化妆品毒理测试中的急性经口毒性测试动物禁食时间要求

急性经口毒性测试是化妆品原料及成品毒理安全性评估的基础项目，旨在评价动物单次经口接触受试物后的毒性反应及致死剂量。其中，实验动物的禁食时间是影响测试结果准确性与重复性的关键变量——不当的禁食时长会干扰受试物的胃肠道吸收、改变动物代谢状态，甚至导致数据偏差。本文围绕化妆品毒理测试中急性经口毒性实验的禁食时间要求展开，结合国内外标准与实践经验，详解其目的、具体规定及操作要点。

急性经口毒性测试中禁食的核心目的

在急性经口毒性测试中，动物禁食的首要目的是消除胃内容物对受试物吸收的干扰。正常进食状态下，动物胃内的食物（如饲料颗粒、消化液）会与受试物混合，延缓其在胃肠道的溶解与扩散，导致吸收速率变慢、吸收量减少——这会直接低估受试物的实际毒性，使LD50（半数致死剂量）结果虚高。

其次，禁食能减少动物给药后的呕吐或反流风险。若胃内有食物，受试物可能刺激胃黏膜引发呕吐，导致部分受试物被吐出，无法准确计算实际摄入剂量。对于小鼠、大鼠等不易呕吐的动物，禁食仍能避免胃内容物“稀释”受试物，确保剂量与效应的对应关系。

此外，禁食是实验条件“标准化”的关键环节。不同动物的进食时间、食量存在个体差异，统一禁食能让所有实验动物处于相同的生理状态（如胃排空程度、血糖水平），保证实验数据的可比性。

常见实验动物的禁食时间规定

目前，化妆品毒理测试的急性经口毒性实验主要遵循《食品安全国家标准 急性经口毒性试验》（GB 15193.3-2014）与经济合作与发展组织（OECD）《急性经口毒性试验指南》（OECD 401）的要求，两类标准对常见实验动物的禁食时间规定一致。

对于大鼠与小鼠（化妆品测试中最常用的动物），实验前需禁食16~24小时，且禁食期间不禁水；给药后需继续禁食2~4小时，以促进受试物在胃肠道的吸收。这一时间段的设定基于动物生理特点——大鼠小鼠的胃排空时间约为4~6小时，16~24小时禁食可确保胃完全排空，同时避免动物因长时间饥饿出现代谢紊乱。

对于豚鼠与家兔（较少用于化妆品急性经口测试，但部分原料可能涉及），实验前禁食时间为12~24小时，给药后继续禁食4~6小时。豚鼠的胃容量较小，家兔的消化道更长，因此禁食时间略短于大鼠小鼠，避免过度饥饿影响健康。

禁食时间对实验结果的影响

禁食时间不足是导致测试数据偏差的常见原因。若动物未充分禁食（如仅禁食8小时），胃内残留的食物会形成物理屏障，阻碍受试物与胃黏膜接触，降低吸收效率。例如，某脂溶性化妆品原料按2000mg/kg剂量给药时，禁食8小时的大鼠胃内食物残留率约30%，导致实际吸收量仅为禁食24小时组的60%，最终LD50结果比真实值高1.5倍。

禁食过久则会改变动物的代谢状态。大鼠小鼠禁食超过24小时后，体内肝糖原储备耗尽，会启动脂肪代谢，导致血糖下降、体重减轻。此时动物对受试物的敏感性可能升高——例如，低血糖会增强某些神经毒性物质的作用，使死亡率增加，从而低估LD50值。此外，体重下降会影响剂量计算的准确性（急性经口毒性剂量通常按“每千克体重给药量”计算），若未及时调整，可能导致实际给药量偏离预期。

禁食期间的操作细节

禁食的时机选择需结合实验节奏。通常的做法是：实验前一天17:00左右移除动物笼内的饲料（保留饮水瓶），第二天9:00~10:00给药，确保禁食时间在16~18小时之间。这种“傍晚禁食、上午给药”的模式符合动物的昼夜节律，减少对其活动与应激水平的影响。

禁水的控制需兼顾“避免呕吐”与“维持动物状态”。根据OECD 401指南，给药前30分钟至1小时需移除饮水瓶——若给药时动物刚饮水，胃内水分会稀释受试物，或因胃部扩张引发反流；但禁水时间过长（如超过2小时）会导致动物口渴，给药时挣扎加剧，增加操作难度。

禁食期间需每日观察动物状态。虽然16~24小时禁食对健康成年大鼠小鼠无显著伤害，但需注意是否出现异常行为（如过度烦躁、啃咬笼具）或体重下降（若禁食24小时后体重下降超过5%，需调整禁食时间）。此外，需避免不同笼具的动物互相舔食残留饲料，可将动物单独饲养或使用带网格底的 cages，防止饲料残留。

特殊情况的禁食调整

幼龄动物的禁食时间需缩短。小鼠幼崽（出生21天内）的代谢速率是成年鼠的2~3倍，肝糖原储备仅能维持8小时。若按成年鼠标准禁食16小时，幼崽会出现严重低血糖（血糖值低于4mmol/L），甚至死亡。因此，幼龄动物的禁食时间通常控制在8~12小时，并在禁食期间补充少量葡萄糖水（如5%葡萄糖溶液），以维持血糖稳定。

妊娠动物的禁食时间也需调整。大鼠妊娠中期（孕10~15天）的能量需求增加，禁食超过12小时会导致胎儿发育迟缓。此类情况下，可将禁食时间缩短至12小时，并在给药后立即恢复饲料供应。需注意的是，调整后的禁食时间需在实验报告中详细记录，确保数据可追溯。

不同测试方法对禁食的要求

无论是经典的寇氏法（用于计算LD50）、限量法（用于判定LD50上限）还是累积剂量法，急性经口毒性测试的禁食要求均一致。例如，限量法（如按GB 7919要求测试化妆品成品的急性经口毒性，剂量为5000mg/kg）中，动物需遵循16~24小时禁食规定——若未充分禁食，即使受试物实际LD50为3000mg/kg，也可能因吸收不足导致“无死亡”的假阳性结果，误判为LD50>5000mg/kg。

需注意的是，部分特殊测试（如“反复经口毒性预试验”）可能调整禁食时间，但此类实验不属于急性经口毒性测试范畴。在化妆品毒理评估中，所有急性经口毒性实验的禁食操作均需严格遵循GB 15193.3或OECD 401的规定，确保结果符合 regulatory requirements。