化妆品毒理测试中的皮肤刺激性测试样品制备有哪些注意事项

化妆品皮肤刺激性测试是评估产品安全性的核心环节，而样品制备作为测试的“第一步”，直接影响结果的真实性与可靠性。若制备过程存在偏差（如浓度不准确、载体选择不当），可能导致假阳性或假阴性结论，误导产品安全评估。因此，需严格遵循一系列注意事项，确保样品能真实反映产品在实际使用中的刺激性特征。

样品需保持与实际使用状态的一致性

化妆品剂型多样（膏霜、液体、粉末、气雾剂等），样品制备需优先还原终产品的“真实使用形态”。例如，乳液类产品需充分摇匀至无分层，避免水相、油相分离导致局部浓度不均；膏霜类需用研钵研磨5-10分钟，确保基质细腻无颗粒——若存在粗颗粒，涂敷时会摩擦皮肤，造成物理性红肿，混淆化学刺激的结果。粉末类产品（如散粉、眼影）需过100目筛，去除大颗粒杂质，保证颗粒大小均匀；气雾剂类需垂直喷射收集中间部分（避免初喷时的浓度波动），确保样品代表喷出后的实际成分。

此外，样品需包含终产品的所有组分，不能仅测试单一成分。例如，含有“玻尿酸+烟酰胺”的精华液，需混合所有组分后制备，而非单独测试烟酰胺——成分间可能存在协同（如烟酰胺增强玻尿酸的渗透）或拮抗作用，单独测试无法反映实际刺激性。

载体选择需兼顾兼容性与无干扰性

部分原料（如精油、浓缩液）或稀薄样品（如爽肤水）无法直接涂敷，需借助载体分散。载体的核心要求是“自身无刺激性”且“与样品兼容”：油性样品（如精油）需选凡士林、羊毛脂等油性载体，水溶性样品（如玻尿酸精华）需选蒸馏水或生理盐水，避免载体与样品发生化学反应或分散不均。例如，将精油溶于凡士林可保证均匀分散，若误用蒸馏水，会导致精油聚集成小滴，形成局部高浓度区域，引发过度刺激；而水溶性精华用油性载体则会阻碍皮肤吸收，低估刺激性。

需避免载体与样品发生化学作用：含有酸性成分（如维生素C）的样品不能用碱性载体（如碳酸氢钠溶液），否则会中和活性成分；含有氧化性成分（如过氧化氢）的样品不能用还原性载体（如维生素E油），避免活性失效。载体用量需恒定，通常样品与载体比例为1:1至1:3（质量比），确保样品均匀分散且不被稀释。

浓度设定需严格匹配实际使用场景

样品浓度是刺激性测试的“核心参数”，需完全贴合日常使用浓度。例如，某乳液的活性成分浓度为3%，测试时即使用3%浓度，不能稀释至1%（低估刺激）或浓缩至5%（高估刺激）。对于原料测试（如化妆品新原料），需采用“最高使用浓度”（即终产品中原料的最大添加量），评估其极限刺激性；对于复配原料，需按终产品中的比例混合后测试，而非单独测试各组分。

需关注活性成分的稳定性：易氧化（如视黄醇）、易降解（如维生素C）的成分需临用前制备，并在1小时内完成测试；若需储存，需添加无刺激性稳定剂（如BHT抗氧剂），但需验证稳定剂本身无刺激——可通过“稳定剂+载体”的空白对照测试，确保无干扰。

均一性是避免结果偏差的关键

均一性指样品中各组分分布一致，避免局部浓度差异。例如，膏霜类样品需研磨至“无肉眼可见颗粒”，确保防腐剂、活性成分均匀分散；粉饼类样品需粉碎后过筛，颗粒大小≤100μm——若某区域防腐剂浓度过高，会导致局部强刺激，而其他区域无反应，造成结果波动。

制备过程需保证重复性：同一批次需制备3-5份平行样，测试时取平均值。例如，制备5份相同的面霜样品，若某份样品的刺激性评分比其他4份高2倍，需重新研磨该样品——差异可能源于研磨不充分，导致局部活性成分聚集。

稳定性控制防止样品变质

制备好的样品需在规定条件下储存，避免成分变化或污染。例如，含有挥发性成分（如酒精、精油）的样品需密封储存于4℃冰箱，防止挥发导致浓度升高；水性样品（如玻尿酸原液）需过滤除菌（0.22μm滤膜）或添加0.1%尼泊金甲酯（无刺激性防腐剂），防止细菌滋生——微生物代谢产物（如内毒素）会增强刺激性，导致假阳性。

需记录样品的制备时间与储存条件：例如，“2024年5月15日制备，4℃密封保存，24小时内使用”。若超过有效期，即使外观无变化，也需重新制备——维生素C等成分可能降解为脱氢抗坏血酸，刺激性增强；酒精类样品可能挥发导致浓度降低，结果不准确。

空白对照需与样品同步制备

空白对照是判断“刺激性来源”的关键，需与样品同批次、同条件制备。例如，若样品为“精油+凡士林”，对照需为“纯凡士林”；若样品为“精华液+蒸馏水”，对照需为“纯蒸馏水”。对照需经历与样品相同的储存、涂敷流程（如4℃储存、涂敷4小时），确保排除载体、操作等因素的干扰。

需注意：对照的涂敷量、面积需与样品一致。例如，样品涂敷量为2mg/cm²，对照也需涂敷2mg/cm²；样品涂敷时间为24小时，对照也需24小时。若对照出现刺激性（如凡士林导致皮肤红肿），则该批次测试无效，需更换载体重新制备。

样品量与新鲜度需严格管控

涂敷量是刺激性测试的“量化标准”，需准确一致。通常按“2mg/cm²”或“5mg/cm²”的标准涂敷（依测试方法如Draize法要求），需用微量天平称量，避免手动涂抹导致的量差——量多会增加皮肤负担，量少则无法覆盖测试区域，均会影响结果。

样品需“临用前制备”，尤其是含易降解成分的产品。例如，维生素C精华需早上制备、下午测试，避免放置过夜后降解为刺激性更强的脱氢抗坏血酸；视黄醇霜需在避光条件下制备，防止氧化失效。若需批量制备，需将样品分装至密封容器，减少与空气接触的机会。

避免交叉污染与工具清洁

制备不同样品时，工具需彻底清洁，防止交叉污染。例如，研钵、玻璃棒需用75%乙醇消毒，晾干后再用；称量纸需一次性使用，避免前一个样品的残留粘附。若测试“强刺激性样品”（如辣椒素提取物）后，需用洗洁精+清水反复清洗工具，再用乙醇消毒，防止残留刺激下一个样品。

此外，操作环境需保持清洁：制备水性样品时需在无菌工作台操作，避免微生物污染；制备油性样品时需避免灰尘落入，防止杂质影响均一性。