USP 61版微生物限度检测与EP 2.6.12版的主要差异对比分析

微生物限度检测是药品非无菌制剂质量控制的核心环节，直接关联药品安全性与合规性。美国药典USP 61版与欧洲药典EP 2.6.12版作为全球主流标准，因地域监管逻辑与技术细节差异，在检测流程、要求上存在诸多不同。对于需同时满足美欧市场需求的企业而言，厘清两者核心差异是优化检测方法、规避合规风险的关键。

样品制备：稀释剂、均质与稀释级的细节分歧

USP 61与EP 2.6.12在样品制备的核心差异体现在“灵活性”与“严谨性”的平衡。USP 61规定稀释剂优先选0.1%蛋白胨水或pH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液，含防腐剂的样品需加中和剂（如卵磷脂+聚山梨酯80）；EP 2.6.12则要求稀释剂必须“无抑菌性且维持菌活力”，中和剂需通过验证，且明确油脂类样品需用10g/L聚山梨酯80分散。

均质条件上，USP允许均质器（8000-10000rpm，1-2分钟）或玻璃珠振荡（200rpm，10分钟）；EP则强制均质≥2分钟，转速需保证样品完全分散，且均质后15分钟内接种，避免菌死亡。

稀释级别要求更直观：USP需至少2个连续稀释级（如1:10、1:100），每级接种2个平皿；EP需至少3个稀释级，每级接种3个平皿，通过增加平行样减少误差。

计数项：培养基与培养条件的差异

需氧菌计数的培养基选择是典型差异：USP用大豆酪蛋白琼脂（SPCA），培养30-35℃、24-72小时（可提前计数）；EP用胰酪大豆琼脂（TSA，胰蛋白酶消化更充分），同样温度但需满72小时，避免漏计慢生长菌。

霉菌酵母菌计数中，USP用马铃薯葡萄糖琼脂（PDA）或玫瑰红钠琼脂，培养20-25℃、5-7天；EP用沙氏葡萄糖琼脂（SDA），培养时间相同，但允许酵母菌“3天菌落稳定可提前计数”，霉菌需满5天。

接种方法上，USP允许涂布法或倾注法；EP优先推荐倾注法（除非样品粘性大），因倾注法能更均匀分散样品与菌，减少菌落重叠。

控制菌：目标菌范围与检测方法的差异

控制菌是“对人体有潜在危害的致病菌”，两者差异在“覆盖范围”与“方法灵敏度”。USP 61的控制菌包括大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、沙门氏菌，部分口服制剂加蜡样芽孢杆菌；EP 2.6.12则新增克罗诺杆菌（针对婴幼儿药品）、产气荚膜梭菌（针对肠道制剂），更贴合欧洲对特殊人群的保护。

大肠杆菌检测中，USP用MUG试验（紫外荧光判断，需生化确认）；EP用显色培养基法（如CHROMagar E.coli，蓝色菌落直接阳性），无需额外步骤，更快捷。

沙门氏菌检查中，USP前增菌用营养肉汤（18-24小时）、增菌用四硫磺酸钠亮绿肉汤（18-24小时）；EP前增菌用缓冲蛋白胨水（24-48小时）、增菌用亚硒酸盐胱氨酸肉汤（24-48小时）——EP增菌时间更长，帮助受伤沙门氏菌恢复活力，提高检出率。

结果判定：菌落数范围与异常处理的差异

USP 61计数时选“30-300菌落数”的稀释级：两稀释级符合取平均，一稀释级符合用该数，超300取高稀释级，低于30判“<最低可计数”。

EP 2.6.12的范围更严：需氧菌15-300、霉菌酵母菌10-100——低于下限需重测；平皿间差异要求≤50%（如10与15可接受，10与20无效），USP允许差异≤1倍。

抑菌性样品：中和剂验证与膜过滤的差异

USP 61处理抑菌性样品可选稀释法、中和法、膜过滤法（冲洗3次×100ml）；EP更强调中和剂验证：需证明中和剂完全中和抑菌性、不抑制菌生长（回收率≥70%）、中和产物无干扰。

膜过滤法中，EP要求冲洗体积≥300ml（3次×100ml），USP允许分2次×150ml——EP认为多次小体积冲洗更彻底去除抑菌残留。此外，EP要求冲洗液无抑菌性，需验证蛋白胨水等冲洗液对菌无毒性。