CLSI EP25指南中临床前性能验证精密度评估的简化方法

CLSI EP25是临床实验室开展体外诊断试剂（IVD）临床前性能验证的核心指南，其中精密度评估因直接关联试剂批内/批间一致性、影响临床结果可靠性，成为验证的“必查项”。传统精密度评估常因样本量需求大、实验周期长、变量覆盖全让实验室面临效率压力，而指南中提及的简化方法通过“聚焦关键变异源、优化实验设计”，为平衡验证质量与效率提供了可行路径。本文将拆解EP25中精密度评估简化方法的逻辑、步骤与质控要点，助力实验室高效落地验证工作。

精密度在EP25中的核心定位：从“指标”到“临床可靠性”

在EP25指南中，精密度被定义为“规定条件下多次测量结果的一致性”，具体分为“重复性”（同一批次、操作者、仪器短时间内的变异）与“中间精密度”（不同批次、时间、操作者的变异）。对临床而言，精密度直接影响诊断准确性——若某血糖试剂批间CV达15%，同一患者用两批试剂检测可能出现“5.8mmol/L（正常）”与“6.8mmol/L（异常）”的矛盾结果，干扰临床决策。因此，精密度评估是临床前验证中“判断试剂是否能进入临床”的关键门槛。

传统精密度评估的设计逻辑是“覆盖所有可能的变异”：需5批试剂、20天实验、2个浓度水平、3次重复，总样本量达600个（5批×20天×2浓度×3重复）。这种设计虽全面，但对临床前阶段的试剂（如研发中的新试剂）或小实验室而言，资源投入过高——研发团队更需“快速验证核心性能”，而非“覆盖所有场景”。

传统方法的痛点：为什么需要简化？

传统精密度评估的痛点集中在“三难”：一是样本难——需准备高、低浓度的新鲜样本，且每批实验需重复制备；二是时间难——20天连续实验需占用仪器与人力，影响常规检测；三是统计难——需用多因素方差分析（ANOVA）分解批间、批内、操作者的变异，对实验室统计能力要求高。

EP25中的简化方法并非“降低标准”，而是“用数据驱动优化”。指南明确：“当某因素的变异对总精密度的贡献<10%时，可省略该因素的实验”。例如，某化学发光试剂的预实验显示：批间变异占65%、浓度占25%，而操作者仅占10%——此时可省略操作者的重复实验，将样本量从600个减少到360个（3批×20天×2浓度×3重复），效率提升40%。

简化方法的核心逻辑：从“全因素”到“风险优先”

EP25简化方法的本质是“聚焦对精密度影响最大的因素”。实验室需先通过1-2批预实验，用方差分析（ANOVA）计算各因素的变异系数（CV），再根据CV占比筛选关键因素。例如，某新冠抗原试剂的预实验显示：

- 批间变异CV：12%（占总变异60%）；

- 浓度水平CV：5%（占25%）；

- 操作者CV：2%（占10%）；

- 仪器CV：1%（占5%）。

此时，实验设计可聚焦“批次”与“浓度”两个变量，省略操作者与仪器的重复实验，将总实验时间从20天压缩到10天（覆盖试剂开瓶后14天的稳定期），样本量减少至36个（3批×5天×2浓度×3重复）。

样本量优化：选“关键浓度”而非“全浓度”

样本量的简化是最易落地的环节。传统方法要求“2个浓度（低、高）×3次重复”，但简化方法中可调整为“1-2个临床关键浓度”——即参考区间边界或临床决策点。例如：

- 糖尿病检测试剂：临床决策点是7mmol/L（空腹血糖异常），可选7mmol/L（参考上限）与10mmol/L（临床高值）两个浓度，覆盖常用场景；

- 肿瘤标志物检测试剂：临床决策点是25ng/mL，可选20ng/mL（参考上限）与30ng/mL（临床高值），避免无关浓度的冗余实验。

此外，样本类型的选择也可简化：若试剂主要用于血清样本，且说明书未提及血浆或全血，则可仅做血清样本的精密度，无需覆盖所有样本类型。

时间维度的压缩：覆盖“使用周期”而非“长期追踪”

传统方法需20天连续实验，但简化方法可根据试剂的“使用周期”调整时间点。例如：

- 开瓶后稳定期为14天的试剂：选第1天（开瓶当天）、第7天（中期）、第14天（末期）3个时间点，每个时间点做1批实验，覆盖试剂的全使用周期；

- 开瓶后稳定期为48小时的试剂（如新冠抗原）：选第1天与第2天2个时间点，覆盖使用周期内的变异。

这种设计既压缩了时间，又保证了结果的代表性——若试剂在使用周期内的精密度稳定，长期追踪的意义并不大。

统计方法的简化：避免“过度复杂”

传统精密度评估需用多因素方差分析分解变异，但简化方法中若变量减少，可改用更简单的统计工具：

- 仅涉及“批次”与“浓度”两个变量时，用双因素方差分析判断交互作用（如高浓度的批间差异是否更大）；

- 仅涉及“批次”一个变量时，用t检验比较两批试剂的均值差异，判断批间一致性；

- 数据符合正态分布时，用标准差（SD）计算CV；若偏态分布，用中位数绝对偏差（MAD）替代，避免“为正态分布而做数据转换”的繁琐。

实施简化方法的关键质控点

简化方法的核心是“保证结果的可靠性”，因此需坚守三个“不能省”：

1、质控品的使用：每批实验必须带质控品，确保实验过程稳定。例如，若某批次的质控品结果超出±2SD，需重新测试该批次，排除仪器或试剂误差；

2、数据追溯性：需记录每批实验的操作者、仪器编号、试剂批次、实验时间、样本浓度等信息，以便后续追溯变异来源——例如，若某批次的CV突然升高，可通过记录回溯到“试剂批次过期”或“仪器未校准”；

3、最低标准的坚守：EP25规定简化方法的最低要求是“2个批次×2个浓度×3次重复”，不可低于此标准——例如，不能只用1个批次或1个浓度，否则结果的可靠性无法保证。

常见误区：简化不是“随意删减”

实验室最易陷入的误区是“主观省略关键因素”：

- 例如，某试剂说明书提及“可用于血清与血浆”，但实验室为简化仅做了血清样本的精密度，导致后续临床使用中血浆样本结果偏差；

- 再如，某试剂用于3种仪器型号，但实验室仅用1种仪器做实验，结果无法推广到其他型号；

- 还有实验室为省时间，将重复次数从3次减少到2次，导致CV计算的误差增大（3次重复的CV更稳定）。

这些误区的本质是“用简化牺牲质量”——而EP25的简化方法要求“用数据驱动简化”，而非主观判断。实验室需先做预实验，用数据证明“某因素的影响极小”，再省略该因素。