利用分光光度法进行水样检测中氨氮含量的操作指南

氨氮是反映水体富营养化与污染程度的关键指标，分光光度法因准确性高、操作简便，成为水样氨氮检测的主流技术。本文结合《水质 氨氮的测定 纳氏试剂分光光度法》（HJ 535-2009）标准流程与实践细节，梳理分光光度法检测氨氮的完整操作指南，助力实验室及现场检测的规范化执行。

试剂与材料准备

核心试剂需满足纯度要求：①纳氏试剂（碘化汞-碘化钾-氢氧化钠配方）：7g碘化钾溶于10ml无氨水，加10g碘化汞搅拌溶解，再加入24g氢氧化钠（溶于70ml无氨水），定容至100ml，静置24小时取上清，冷藏（4℃）保存；②酒石酸钾钠溶液（500g/L）：500g酒石酸钾钠溶于无氨水，煮沸10分钟除氨，冷却后定容；③氨氮标准储备液（1000mg/L）：3.8190g优级纯氯化铵（105℃干燥2小时）溶于无氨水，定容至1000ml；④无氨水：通过蒸馏或离子交换法制备，避免吸收空气中的氨。

耗材包括10ml具塞比色管（带刻度，误差≤0.05ml）、5ml/10ml移液管（A级）、中速定量滤纸；所有玻璃器皿需用盐酸（1+9）浸泡2小时，去除氨污染，再用无氨水冲洗3次，倒置晾干。

仪器校准与检查

分光光度计需提前30分钟预热，开启钨灯待光源稳定。波长校准：用汞灯的435.8nm谱线调整波长至最大值，再将波长调至420nm（纳氏试剂法特征波长），确保误差≤0.5nm；无汞灯时，用0.04g/L铬酸钾溶液（溶于0.05mol/L硫酸）在440nm下测吸光度（标准值约0.220），偏差≤0.005。

空白调零：取10ml无氨水加入比色管，按显色步骤加1ml酒石酸钾钠、1ml纳氏试剂，混匀静置10分钟后，放入样品池调零（吸光度显示0.000）。空白吸光度需≤0.010，否则需检查无氨水质量或器皿清洁度。

浑浊水样预处理（絮凝沉淀）

针对浊度较高的河水、生活污水，取100ml水样于锥形瓶，加1ml硫酸锌溶液（100g/L）搅拌均匀，缓慢滴加0.1ml氢氧化钠溶液（250g/L），调pH至10.5（pH试纸检测），静置30分钟让絮体沉降。

用中速滤纸过滤，弃去初滤液20ml（避免滤纸杂质污染），收集后续滤液至干净烧杯，4小时内检测；絮凝效果差时，可增加硫酸锌至1.5ml，但不超过2ml（避免引入过多杂质）。

干扰水样预处理（蒸馏）

针对含挥发性有机物、硫化物的水样，取250ml水样于蒸馏瓶，加5ml硼酸吸收液（20g/L）、数粒玻璃珠（防暴沸），连接冷凝管（出口插入吸收液液面下2cm）。

加热蒸馏至馏出液达200ml，停止加热后用无氨水冲洗冷凝管，定容至250ml。蒸馏时保持冷凝水流动，避免氨挥发；水样不能蒸干，防止损坏仪器。

标准曲线绘制

取6支10ml比色管，分别加0、0.5、1.0、2.0、3.0、5.0ml氨氮标准使用液（10mg/L，由储备液稀释100倍），用无氨水定容至10ml。加1ml酒石酸钾钠、1ml纳氏试剂，混匀静置10分钟。

以氨氮质量（μg）为横坐标、吸光度为纵坐标绘曲线，计算回归方程（要求R²≥0.999，截距≤0.005）。每批样品前用中间浓度（如20μg）核查曲线，偏差≤5%则继续使用。

样品显色与比色

取5-10ml预处理水样（氨氮浓度超5mg/L需稀释）加入比色管，定容至10ml。加1ml酒石酸钾钠摇匀，再加1ml纳氏试剂，塞紧颠倒混匀3次，静置10分钟（20-25℃，低于20℃需恒温）。

比色前擦拭比色管外壁（避免指纹），放入分光光度计读取吸光度，平行测2次取平均（差值≤0.005）。吸光度超曲线上限需稀释重测，确保结果在 linear 范围内。

结果计算与质量控制

氨氮浓度公式：C（mg/L）=（m×V₁）/（V×V₂），其中m为标准曲线查得的氨氮质量（μg），V₁为预处理后定容体积（ml），V为原水样体积（ml），V₂为测定时取的预处理样品体积（ml）。例如，原水样250ml，预处理后定容250ml，取10ml测定，则C=m×250/（250×10）=m/10。

质量控制：每批做2个空白（吸光度差≤0.005）、10%平行样（相对偏差≤5%）、1个加标回收（回收率95%-105%），确保结果准确；标准曲线每批核查，偏差超5%需重绘。