矿泉水水样检测中微生物总数的培养条件及计数方法

矿泉水作为直接饮用的包装饮用水，其微生物指标直接关系到消费者健康。微生物总数是评估矿泉水卫生质量的核心指标之一，准确检测依赖规范的培养条件与科学计数方法。本文围绕矿泉水水样检测中微生物总数的培养条件（培养基、温度、时间等）及常用计数方法展开说明，为检测人员提供实操参考。

微生物总数检测的样本采集与预处理

样本采集需用经121℃高压灭菌20分钟的无菌容器，采样时避免容器口接触污染物。矿泉水需从开启后立即采集，量不少于250mL，4℃运输并2小时内送检（无法及时检测则冷藏不超过24小时）。

检测前需摇匀水样（避免微生物沉淀），若微生物含量低需梯度稀释：取1mL水样加9mL无菌生理盐水制10倍液，依次制备10²、10³等稀释度，确保平板菌落数在30～300CFU间。

稀释液需现配且无菌，每步更换吸管避免交叉污染；含气泡的矿泉水需静置至气泡消失再处理；含颗粒物的水样用无菌纱布过滤，并用生理盐水冲洗纱布合并滤液。

预处理的关键是保证样本代表性——摇匀和稀释能避免微生物分布不均，过滤能排除颗粒干扰，为后续培养提供准确样本。

培养基的选择与制备要求

矿泉水微生物总数检测常用营养琼脂培养基（NA），含蛋白胨10g、牛肉膏3g、琼脂15g、蒸馏水1000mL，能满足多数嗜温异养菌生长，菌落形态清晰便于计数。

制备时需准确称量成分，溶解后调pH至7.2～7.4（用NaOH或HCl），再高压灭菌（121℃20分钟）。灭菌后待培养基冷却至46～50℃（手感不烫）使用，避免高温杀微生物或低温凝固。

培养基需检查质量：无浑浊、沉淀或杂菌；未用的密封存4℃冰箱，保质期7天内；反复加热不超过2次，防止营养成分破坏。

若矿泉水含特殊成分（如高矿化度），需验证培养基适用性——加少量矿泉水观察微生物生长，确保不抑制目标菌。

培养温度的控制要点

按GB 4789.2-2016规定，矿泉水微生物总数培养温度为36℃±1℃，是水中常见嗜温菌（如革兰氏阳性/阴性菌）的最适生长温度，保证微生物充分繁殖成可见菌落。

培养箱需提前1小时预热至设定温度，平板均匀放置（避免堆叠）确保受热均匀；每天至少2次检查温度，波动超±1℃需调整设备，防止温度过高杀微生物或过低导致生长缓慢。

若矿泉水来自深层地下水（含嗜冷菌），可调整温度至28℃，但需在报告中注明，保证结果可追溯。

每季度用标准温度计校准培养箱，记录上下层温度，确保温差≤1℃，避免局部温度不均影响结果。

培养时间的确定依据

培养时间需保证微生物形成可见菌落且不过度繁殖，GB 4789.2-2016规定为48小时±2小时（从平板入箱计时）。

时间不足24小时，多数微生物未形成可见菌落（如慢生菌），结果偏低；36小时时部分革兰氏阳性菌（如芽孢杆菌）仅形成微小菌落，难以识别。

时间超50小时，菌落易融合（稀释度低的平板），或霉菌/酵母菌生长干扰计数；停电等中断培养需重测，无法补时。

计时需准确，入箱后立即记录，取出误差不超30分钟；确保培养时间稳定，是结果准确的基础。

平板涂布法的操作步骤与注意事项

平板涂布法适用于低微生物含量样本，步骤：① 准备标记稀释度的无菌NA平板；② 用吸管取0.1mL稀释水样滴平板中央；③ 用灼烧冷却的涂布棒将水样从中央向四周涂布（旋转平板确保均匀）；④ 液体吸收后（约15分钟）倒置平板入36℃箱培养48小时。

注意：涂布棒灼烧后需冷却30秒（或触平板边缘无气泡），避免杀微生物；涂布时轻压平板，防止划破培养基；选2～3个连续稀释度（如10⁰、10¹），每稀释度做2平行板；每处理一个稀释度换吸管，涂布棒每板后重新灼烧。

优点：操作简单，对微生物损伤小，适用于高含水样本；缺点：含颗粒时影响涂布均匀性，导致菌落分布不均。

涂布后需放置15～20分钟待液体吸收，再倒置培养，避免液体流淌导致菌落集中边缘。

平板倾注法的应用要点

平板倾注法适用于多数水样，步骤：① 取1mL稀释水样加无菌平皿；② 倾注46～50℃的NA培养基约15mL；③ 快速旋转平皿使水样与培养基混合（避免气泡）；④ 凝固后倒置培养48小时。

要点：培养基温度需控制——过高杀微生物，过低凝固无法混合；旋转平皿保持水平，避免溢出或分布不均；选2～3个稀释度做平行板；倾注时缓慢倒，避免气泡。

优点：水样与培养基混合均匀，菌落分布均，适用于含颗粒样本；缺点：高温可能损伤敏感菌（如乳酸菌），导致结果偏低。

倾注后平皿需水平放置至凝固，再倒置培养，防止培养基倾斜导致菌落分布不均。

计数时的菌落识别技巧

矿泉水微生物总数主要是细菌，菌落特征：圆形、边缘整齐、表面光滑湿润、质地柔软、乳白或淡黄色，直径0.5～2mm（48小时后）。

识别注意：① 细菌vs霉菌：霉菌为绒毛/絮状，颜色多样（绿、黑），质地疏松；② 细菌vs酵母菌：酵母菌圆形光滑，质地硬，乳白或淡褐，直径1～3mm（比细菌大）；③ 菌落vs沉淀：矿物质沉淀无光泽、坚硬，触碰不破碎（菌落触碰破碎）。

需用放大镜观察微小菌落（<0.5mm）避免漏计；计数前将平板置室温30分钟，避免冷凝水影响观察；在自然光下从平板底部向上看，菌落更清晰。

记录菌落特征，若发现霉菌/酵母菌需注明——矿泉水微生物总数不应含这类杂菌，异常需排查污染。

结果计算的规范要求

计算步骤：① 选菌落数30～300CFU的平板，取2～3个连续稀释度的平均值；② 微生物总数（CFU/mL）= 平均菌落数×稀释倍数×10（涂布法，因加0.1mL）；倾注法加1mL无需乘10；③ 结果表示：≤100CFU/mL保留整数，>100CFU/mL保留两位有效数字（如150记为1.5×10²）。

注意：同一稀释度平行板相对偏差≤10%（如50和55偏差≈9.5%符合），超10%需重测；所有板菌落>300记“多不可计”，<30记实际数并注明；核对稀释倍数避免计算错误。

结果异常（如远高于标准）需重测，排除采样、培养或计数错误；报告需注明方法（涂布/倾注）、培养条件（36℃48小时）、稀释度，确保可追溯。

计算的核心是准确——稀释倍数、涂布量、平均菌落数的核对，是保证数据可靠的最后一步。